CHO細胞轉(zhuǎn)染大揭秘

CHO細胞（中國倉鼠卵巢細胞）是生物制藥和基礎(chǔ)研究中zui常用的哺乳動物表達宿主之一，用于生產(chǎn)重組蛋白（如治療性抗體、酶、激素等）。轉(zhuǎn)染是將外源核酸（通常是質(zhì)粒DNA）導入CHO細胞內(nèi)的關(guān)鍵步驟。

以下是CHO細胞轉(zhuǎn)染的常見方法、步驟和注意事項：

一、 CHO細胞主要轉(zhuǎn)染方法

?化學轉(zhuǎn)染：使用轉(zhuǎn)染試劑（如聚合物試劑、脂質(zhì)體等）幫助DNA或RNA進入細胞。這種方法的優(yōu)點是操作簡便，適用于常規(guī)實驗。

?電轉(zhuǎn)：通過電場使細胞膜暫時開放，以便DNA/RNA進入細胞。這種方法適用于準備DNA轉(zhuǎn)染或大量細胞轉(zhuǎn)染時。

?病毒介導轉(zhuǎn)染：使用病毒載體（如腺病毒或慢病毒）將目標基因?qū)爰毎D(zhuǎn)染效率高，但制作過程復雜。

二、CHO細胞轉(zhuǎn)染步驟

以使用中科百抗PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit為例。

適用于各種CHO細胞系，包括CHO-S、CHO-K1等。shouxuan ExpiCHO-S。PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit配合PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer使用可大幅度提高重組蛋白的表達產(chǎn)量。

??材料準備：
試劑：PolyToolTM CHO Transfection Reagent、Transfection Reagent Diluent、PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、PolyToolTM Expression Enhancer；
宿主細胞（例：ExpiCHO-S，瞬轉(zhuǎn)前1~2天接種，瞬轉(zhuǎn)當天密度~6×106cells/mL，倍增時間~18 h；

表達質(zhì)粒（例：CMV啟動子驅(qū)動的Trastuzumab表達質(zhì)粒，濃度1 μg/μL；

培養(yǎng)容器（例：125 mL搖瓶）。
??轉(zhuǎn)染（以25mL瞬轉(zhuǎn)體系為例，標準方案）
1.換液：300g離心5 min，收集ExpiCHO-S細胞，換液至37°C預熱好的PolyToolTM CHO Medium中，同時調(diào)整細胞密度到6×106cells/mL。細胞搖床設(shè)定為37°C，8.0% CO2，120 rpm，80% RH（相對濕度）。
2.復合：

①取1.25 mL PolyToolTM CHO Medium（占最終表達體積的5%）稀釋25μg質(zhì)粒DNA（單質(zhì)粒系統(tǒng)質(zhì)量為25μg，雙質(zhì)粒系統(tǒng)總質(zhì)量為25μg），輕柔混勻；

②另取1.25mL PolyToolTM CHO Medium，加入375μL室溫融解的Transfection Reagent Diluent和62.5μL PolyToolTM CHO Transfection Reagent（確保總DNA與轉(zhuǎn)染試劑的質(zhì)量比為1:2.5），輕柔混勻；

③將轉(zhuǎn)染試劑稀釋液緩慢加入質(zhì)粒稀釋液中，立即輕柔混勻，室溫孵育10 min使轉(zhuǎn)染復合物充分形成（復合的時候由于特異的組裝結(jié)構(gòu)可能會出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，不影響使用效果，請放心使用）。
3.轉(zhuǎn)染：從搖床中取出第1步換液培養(yǎng)的ExpiCHO-S，加入孵育好的DNA/PolyToolTMCHO Transfection Reagent復合物，完成轉(zhuǎn)染。放回搖床繼續(xù)培養(yǎng)。
4.轉(zhuǎn)染后18-22h(Day1)：補料2mL Enhance S1（占最終表達體積的8%）、75μL Enhance S2（占最終表達體積的0.3%）和250μL Expression enhancer（占最終表達體積的1%），取樣計數(shù)、測生化。
5.之后每隔三天（若表達7天則在Day4）：補料2mL Enhancer S1（占最終表達體積的8%），取樣計數(shù)、測生化。
6.轉(zhuǎn)染后Day7：取樣計數(shù)、測生化，收獲上清。

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